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Abstract
第23回 日本食品微生物学会学術総会(2002.9.24;東京)
新規遺伝子増幅法LAMP法によるサルモネラ属菌の高感度迅速検出法
吉野学、宮島浩志、砂田亜津子、安中敏光、根本二郎、百田隆祥、小島禎、池戸正成
(栄研化学株式会社 生物化学研究所)
【目的】
食中毒検査、食品検出また環境分析において、サルモネラ属菌を正確に、かつ高感度に検出することが、近年ますます重要になっている。今回我々は新規遺伝子増幅法であるLAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)法によるサル モネラ属菌の高感度迅速検出法を開発したので報告する。

【方法】
サルモネラ属菌間できわめて高率に保存されている侵入性因子関連遺伝子invAを特異的に増幅するLAMPプライマーを設計し、サルモネラ属菌41血清型225株、非サルモネラ属菌79株それぞれ熱抽出したDNAを対象に反応を行った。反応条件は一定温度65℃で、反応液中のインターカレーターによる蛍光強度の変化から、経時的に増幅反応を60分まで解析した。

【結果】
すべてのサルモネラ属菌に対し特異的な増幅反応を示し、非サルモネラ属菌にはまったく無反応で、きわめて良好な特異性を示した。検出感度は反応当たりSalmonella enteritidis菌体60cfu(熱変性処理)であり、反応開始後20分から増幅が始まり、迅速な反応であった。また白色沈殿による濁度の上昇で目視による判別も可能であり、より簡便な検出ができた。

以上の結果から、LAMP法によるサルモネラ属菌の検出は、正確で高感度、そして簡便であり、きわめて有用な方法であると考えられた。

第23回 日本食品微生物学会学術総会(2002.9.24;東京)

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