1. 遺伝子検査を行う上で、検体中に微量しか含まれない核酸を増幅する操作は必須である。我々は、従来の方法よりも簡単な装置で精確に核酸を増幅する方法（LAMP法）を開発した。ここでは、核酸増幅を行う意義も含めて、この新しい核酸増幅法の原理、特徴を発表する。
2. 6つの領域を認識する4種類のプライマー（LAMP用プライマー）をバッファー、基質（dNTPs）、鎖置換型DNA合成酵素および鋳型DNAと混合し、60℃で60分反応させた1)。反応後の溶液に対し、アガロース電気泳動や制限酵素による消化反応などを行った。
3. 反応溶液中に標的DNA(HBV)が共存する場合のみ、LAMP増幅に特徴的なラダーパターンが観察された（レーン1?3）。このLAMP産物を、制限酵素（Ear I）で消化すると、予想されるサイズのバンドに収束した（レーン5）。これは、LAMP反応が標的DNAを特異的に増幅していることを意味する。このように、LAMP法を用いれば、簡易、迅速、精確、安価な遺伝子検出が可能となる。本発表では、LAMP法の原理と特徴を、既存の増幅法（主にPCR法）と比較しながら詳しく発表する。
1) T.Notomi et al., Nucleic Acids Res., 28, e63(2000).
日本化学会 秋季大会（2001.9.20〜23； 千葉） |
